Mēs arī veicam PCR eksperimentus, kāpēc rezultāti vienmēr ir tik daudz sliktāki nekā citiem?

Mēs arī veicam PCR eksperimentus, kāpēc rezultāti vienmēr ir tik daudz sliktāki nekā citiem?

Laboratorijā paskatīties uz citu cilvēku PCR, pastiprināšanas efektivitāte ir augsta, elektroforēzes sloksne perfekta, un paskatieties uz savējo, ilgstoši grūti izdarīt, jūtiet, ka reakcija ir ļoti laba, kļūdaini pozitīva testa rezultāts…… Kas ir problēma?

Uzskatu, ka arī daudzi mūsu partneri ir saskārušies ar dažādām problēmām.Kad PCR eksperimentos ietriecamies sienā, mēs zemapziņā analizēsim faktorus reakcijas sistēmā, taču bieži vien ignorējam palīgmateriālu būtisko ietekmi eksperimentos.

Jūsu PCR rezultāts ir nepareizs, PCR palīgmateriāli var būt galvenais iemesls.No vienas puses, palīgmateriālu mikropiesārņojums vai inhibitoru ieviešana radīs eksperimentālu piesārņojumu;No otras puses, nepareiza palīgmateriālu izvēle ciest arī eksperimenta rezultātus.

Problēma nāk atkal.Ir daudz veidu PCR palīgmateriālu, tāpēc kā izvēlēties pareizos, lai eksperiments būtu raitāks?Kādām problēmām jāpievērš uzmanība?Neuztraucieties, šodienI apvienojumā ar daudzu gadu pieredzi, risinot PCR palīgmateriālu izvēles bieži sastopamās problēmas, es ceru jums palīdzēt.

 

Q1: Kāpēc PCR palīgmateriāli parasti ir izgatavoti no PP materiāla?

Huida: Tā kā PCR materiāli parasti ir tiešā saskarē ar reaģentiem vai paraugiem, polipropilēna (PP) materiāli ir bioloģiski inerti, nepielīp pie biomolekulāriem, un tiem ir laba ķīmiskā tolerance un temperatūras tolerance (var tikt pie 121 grādiem aplauzts ar autoklapu).° C, var izturēt arī temperatūras izmaiņas termiskā cikla laikā).

 

Q2: Kā izvēlēties dažādu izmēru PCR caurulītes/plāksnes?

HUIDA: atlases mērķis: izvēlieties pareizos produktus atbilstoši īpašajām eksperimentālajām prasībām.Lielākā daļa PCR caurules izmēra var atbilst PCR reakcijas prasībām.Pamatojoties uz to, vispirms ieteicams izvēlēties maza tilpuma cauruli.Tā kā maza tilpuma reakcijas caurulei/plāksnei ir maza virsma, tiek uzlabota siltuma vadītspēja un samazināta iztvaikošana.Tajā pašā laikā ir jāizvairās no pārāk daudz vai pārāk maz paraugu pievienošanas.Pārāk daudz var izraisīt siltuma vadītspējas samazināšanos, izšļakstīšanos un savstarpēju piesārņojumu, savukārt pārāk maz var izraisīt parauga iztvaikošanas zudumus.

Parasto reakcijas cauruļu specifikācijas un tilpumi:

Viena/kombinēta caurule: 0,5 ml, 0,2 ml, 0,15 ml

96 iedobju plāksne: 0,2 ml, 0,15 ml

384 bedrīšu plāksne: 0,04 ml

 

Q3: Ja parauga daudzums ir mazs, es izvēlēšos vienu cauruli vai kombinēto cauruli, bet kāpēc dažiem ir plakans vāks, bet dažiem ir izliekts vāks?

Huida: ja parauga daudzums ir mazs, priekšroka tiks dota vienai vai kombinētajai caurulei.Tomēr, ja reakcijas tilpums ir liels, dominē viena caurule, un tilpums var sasniegt 0,5 ml.Un plakanajam vākam un izliektajam vākam ir katra priekšrocība, īpaši var atsaukties uz šādu informāciju.

Viena caurule: 0,2 ml un 0,5 ml;Var elastīgi izvēlēties parauga daudzumu.

Savienojuma caurule: 0,2 ml vai 0,15 ml nav obligāta;Parasti ir 8 vai 12 caurules.

Plakans vāks: var nodrošināt precīzu fluorescences signāla pārraidi qPCR;Viegli rakstīt atzīmes.

Izliekts vāks: saskare ar PCR instrumenta karsto vāciņu, lai samazinātu spiediena izraisīto reakcijas caurules deformāciju;Tomēr tas ietekmēs fluorescences signāla pārraidi, un to nevar izmantot qPCR eksperimentā.

 

Q4: Kāpēc dažām PCR plāksnēm ir apmales, bet dažām nav?

Huida: Faktiski PCR plāksnes apmale ir izstrādāta, lai labāk pielāgotos automatizācijas lietojumiem, nodrošinot instrumentam stabilu atbalstu un mehānisko izturību, kā arī augstāku stabilitāti pipetēšanas procesa laikā.

PCR plates parasti iedala bezmalas, pusmalas un pilnas apakšmalas.

BezPlate: piemērota lielākajai daļai PCR iekārtu vai qPCR iekārtu, bet nav piemērota automatizācijas lietojumprogrammām.Stabilitāte pipetes procesā nav augsta, tāpēc tā ir jāizmanto ar plāksnes atbalstu.

Pussvārku malas plāksne: var pielāgot etiķetes vai svītrkoda uzlikšanai un automātiskai lietošanai, un tai ir laba pipetes stabilitāte.

Pilna svārku malu plāksne: ļoti piemērota automatizētiem eksperimentāliem lietojumiem, var arī pielāgot etiķetei un svītrkoda pielietojumam.Tam ir laba mehāniskā izturība, to var izmantot izliektā moduļa PCR instrumentā, un tam ir augsta stabilitāte pipetēšanas procesā.

 

Q5 :Kāpēc PCR plāksnēm stūri un etiķetes nav gluži vienādi?

Huida: Tas ir atkarīgs no stūra griešanas un marķējuma ietekmes.

Stūra griešana: PCR plāksnes stūra griešanas pozīcijas izvēle ir atkarīga no piemērotā instrumenta prasībām vieglai pozicionēšanai.

Identifikācija: Burtciparu marķieri uz PCR plāksnēm palīdz identificēt atsevišķas iedobes un paraugu atrašanās vietas.Parasti reljefam krāsu digitālajam logotipam vai iegravētam logotipam.Dažiem automatizētiem lietojumiem drukātās un marķētās reakcijas plāksnes ir labāk aizzīmogotas.

 

Q6: Kāpēc dažas PCR plāksnes ir izliektas, bet citas ir plakanas?Kurš ir labāks?

Huida: Kas der, ir vislabākais.Pastāv divu veidu parastās PCR plāksnes: plakana poru mala un augsta poru mala.

Plakanā cauruma malas reakcijas plāksne, piemērota lielākajai daļai PCR aparātu.

Reakcijas plāksnes ar augošām atveru malām atvieglo membrānas blīvēšanu un samazina savstarpējas inficēšanās risku starp paraugiem.

 

Huida ir daudzu gadu pieredze PCR produktu ražošanā un apstrādē, kā arī nozares augsti standarti.Produktu līnija ir bagāta un var atbilst lielākajai daļai PCR eksperimentālo lietojumu.Nāciet un izvēlieties pareizos produktus savām eksperimentālajām vajadzībām.

谷歌推广疫情产品PCR


Publicēšanas laiks: 03.03.2021

Nosūtiet mums savu ziņu:

Uzrakstiet savu ziņu šeit un nosūtiet to mums