Mēs arī veicam PĶR eksperimentus, kāpēc rezultāti vienmēr ir tik daudz sliktāki nekā citi?

Mēs arī veicam PĶR eksperimentus, kāpēc rezultāti vienmēr ir tik daudz sliktāki nekā citi?

Laboratorijā apskatiet citu cilvēku PĶR, amplifikācijas efektivitāte ir augsta, elektroforēzes sloksne ir perfekta, un skatieties uz viņu pašu, kuru grūti izdarīt ilgu laiku, jūtat, ka reakcija ir ļoti laba, kļūdaini pozitīva testa rezultāts problēma?

Es uzskatu, ka arī daudzi no mūsu partneriem ir saskārušies ar dažādām problēmām. Kad PĶR eksperimentos ieskrienam sienā, zemapziņā analizēsim reakcijas sistēmas faktorus, taču eksperimentos bieži ignorējam nozīmīgo palīgmateriālu ietekmi.

Jūsu PCR rezultāts ir nepareizs, būtisks iemesls var būt PCR palīgmateriāli. No vienas puses, palīgmateriālu mikropiesārņojums vai inhibitoru ieviešana izraisīs eksperimentālu piesārņojumu; No otras puses, nepareiza palīgmateriālu izvēle liks ciest arī eksperimentu rezultātus.

Problēma nāk atkal. Ir daudz veidu PCR palīgmateriālu, tāpēc kā izvēlēties pareizos, lai eksperiments būtu vienmērīgāks? Kādas ir problēmas, kurām jāpievērš uzmanība? Neuztraucieties šodienI apvienojumā ar daudzu gadu pieredzi, sakārtojot PCR palīgmateriālu izvēles biežākās problēmas, es ceru jums palīdzēt.

 

1. jautājums: Kāpēc PCR palīgmateriāli parasti ir izgatavoti no PP materiāla?

Huida: Tā kā PCR izejmateriāli parasti ir tiešā saskarē ar reaģentiem vai paraugiem, polipropilēna (PP) materiāli ir bioloģiski inerti, nepieķeras biomolekulām un tiem ir laba ķīmiskā un temperatūras tolerance (tos var autoklapēt pie 121 ° C, var izturēt arī temperatūras izmaiņas termiskā cikla laikā).

 

2. jautājums: Kā man izvēlēties starp dažāda izmēra PCR mēģenēm / plāksnēm?

HUIDA: Atlases mērķis: izvēlieties pareizos produktus atbilstoši konkrētajām eksperimentālajām prasībām. Lielākā daļa PCR mēģenes izmēru var apmierināt PCR reakcijas prasības. Pamatojoties uz to, ieteicams vispirms izvēlēties maza tilpuma cauruli. Tā kā maza tilpuma reakcijas mēģenei / plāksnei ir maza virsotne, siltuma vadītspēja tiek uzlabota un iztvaikošana samazinās. Tajā pašā laikā ir jāizvairās pievienot pārāk daudz vai pārāk maz paraugu. Pārāk daudz var izraisīt samazinātu siltuma vadītspēju, izšļakstīšanos un savstarpēju piesārņojumu, savukārt pārāk maz var izraisīt parauga iztvaikošanas zudumus.

Parasto reakcijas mēģenīšu specifikācijas un tilpumi:

Viena / kombinēta caurule: 0,5 ml, 0,2 ml, 0,15 ml

96 bedrīšu plāksne: 0,2 ml, 0,15 ml

384 bedrīšu plāksne: 0,04 ml

 

3. jautājums: kad parauga daudzums ir mazs, es izvēlos vienu cauruli vai kombinētu cauruli, bet kāpēc dažiem ir plakans vāks, bet dažiem ir izliekts vāks?

Huida: Ja parauga daudzums ir mazs, priekšroka tiks dota vienai caurulei vai kombinētajai mēģenei. Tomēr, ja reakcijas tilpums ir liels, dominē viena caurule, un tilpums var sasniegt 0,5 ml. Katram plakanajam un izliektajam pārsegam ir priekšrocība, konkrēti var atsaukties uz šo informāciju.

Viena caurule: 0,2 ml un 0,5 ml; Var elastīgi izvēlēties parauga daudzumu.

Savienojošā caurule: 0,2 ml vai 0,15 ml nav obligāta; 8 vai 12 caurules ir izplatītas.

Plakans vāks: var nodrošināt precīzu fluorescences signāla pārraidi qPCR; Viegli rakstāmas atzīmes.

Izliekts apvalks: kontakts ar PCR instrumenta karsto vāku, lai mazinātu spiediena radīto reakcijas caurules deformāciju; Tomēr tas ietekmēs fluorescences signāla pārraidi, un to nevar piemērot qPCR eksperimentam.

 

4. jautājums: Kāpēc dažām PCR plāksnēm ir svārki, bet dažām nav?

Huida: Faktiski PCR plāksnes svārki ir paredzēti, lai labāk pielāgotos automatizācijas lietojumiem, nodrošinot instrumentam stabilu atbalstu un mehānisko izturību, kā arī lielāku stabilitāti pipetēšanas procesā.

PCR plāksnes parasti iedala ne-hemline, half-hemline un full-hemline.

Bez Plate: piemērots lielākajai daļai PCR mašīnu vai qPCR mašīnu, bet ne automatizācijas lietojumiem. Stabilitāte pipetēšanas procesā nav augsta, tāpēc tā jāizmanto ar plāksnes atbalstu.

Puse svārku malu plāksnes: var pielāgot etiķetes vai svītru koda lietošanai un automātiskai uzklāšanai, un tai ir laba pipetēšanas stabilitāte.

Pilna svārku malu plāksne: ļoti piemērota automatizētai eksperimentālai lietošanai, var arī pielāgot etiķetei un svītru koda lietošanai. Tam ir laba mehāniskā izturība, to var izmantot izspiestā moduļa PCR instrumentā, un tam ir augsta stabilitāte pipetēšanas procesā.

 

Q5 :Kāpēc PCR plāksnēm stūri un etiķetes nav pilnīgi vienādas?

Huida: Tas ir atkarīgs no stūra griešanas un marķēšanas ietekmes.

Stūra griešana: PCR plāksnes stūra griešanas stāvokļa izvēle ir atkarīga no piemērota instrumenta prasībām, lai to viegli novietotu.

Identifikācija: burtciparu marķieri uz PCR plāksnēm palīdz noteikt atsevišķas akas un paraugu vietas. Parasti reljefa krāsainam digitālajam logotipam vai iegravētam logotipam. Dažām automatizētām lietojumprogrammām drukātas un marķētas reakcijas plāksnes ir labāk noslēgtas.

 

6. jautājums: kāpēc dažas PCR plāksnes ir izliektas, kamēr citas ir plakanas? Kurš ir labāks?

Huida: Vislabāk ir tas, kas der. Ir divu veidu kopīgas PĶR plāksnes: plakana poru mala un augsta poru mala.

Plakano caurumu rezerves reakcijas plāksne, piemērota lielākajai daļai PCR aparātu.

Reakcijas plāksnes ar augošām atveres malām atvieglo membrānas noslēgšanos un samazina paraugu savstarpējas piesārņošanas risku.

 

Huidai ir daudzu gadu pieredze PCR produktu ražošanā un apstrādē, kā arī nozares augstie standarti. Produktu līnija ir bagāta un var apmierināt lielāko daļu PCR eksperimentālo lietojumu. Nāciet un izvēlieties pareizos produktus eksperimentālajām lietojumprogrammām.

谷歌推广疫情产品PCR


Izlikšanas laiks: 03.-2021. Jūnijs